Methanol

别名：甲醇 ;木醇,木精

Cas号：67-56-1

物化性质：

分子式：CH₄O

熔点：-98 °C(lit.)

分子量：32.04

沸点：65.4 °C(lit.)

EINECS编号：200-659-6

密度：0.791 g/mL at 25 °C

MDL号：MFCD00004595

储存条件：室温

中文名称 总糖含量检测试剂盒
产品货号：BC2710

储存条件 2-8℃

有效期 6个月

英文名称 Total Carbohydrate Content Assay Kit

检测方法 可见分光光度法 Spectrophotometer

单位 盒

规格 50T/48S

货号：EK-5301-200ml

中文名称：RNAEx ZOL RNA提取试剂（同Thermo的Trizol）
应用：RNA提取
运输条件：常温运输

【保存条件】

4ºC 避光保存一年

【概述】

RNAEx ZOL Reagent 是即用型细胞和组织总 RNA 提取试剂，该试剂是一步法苯酚和异硫氰酸胍解决方案。该试剂可保持样品 RNA 的完整性，同时破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分享成水相和有机相。RNA 存于水相，通过异丙醇沉淀回收。

此方法可完美应用于少量人类、动物、植物或细菌来源的组织和细胞，允许大量样本同时处理。整个过程可在一小时内完成，同时可避免蛋白质和 DNA 污染。

【操作方法】

1. 样品处理：

a. 组织：将组织在液氮中研磨，磨碎后及时于每 50-100mg 组织中加入 1ml RNAEx ZOL Reagent，样品体积不应超过 RNAEx ZOL Reagent 体积的 10%（或使用匀浆仪器）。

b. 单层细胞：直接在培养皿中裂解细胞，如35mm直径的培养皿中加入1ml RNAEx ZOL Reagent，使用吸头吹匀促进细胞裂解。RNAEx ZOL Reagent 的试剂量基于培养的表面积而不是细胞数量（每 1cm2加入 1ml RNAEx ZOL Reagent）, RNAEx ZOL Reagent试剂量不足可能会导致分离出的 RNA 有 DNA 污染。

c. 悬浮细胞：先低速离心沉淀细胞，弃培养液后加入 RNAEx ZOL Reagen（t 1ml RNAExZOL Reagent 加入至 5×106动物、植物、酵母或细菌细胞中）。加入 RNAEx ZOL Reagent 前避免洗涤细胞，这容易导致 mRNA 降解。一些酵母和细菌细胞的裂解可能需要使用均质器。

可选：一些样品可能需要额外的分享步骤，这些样品蛋白质、脂肪、多糖或细胞外基质含量高，如肌肉、脂肪组织、以及部分植物块茎。在根据上述方式处理后，于2-8°C，12000g 离心 10 分钟，移除沉淀不溶物，RNA 存于上清中。

2. 相分离

a. 将加完 RNAEx ZOL Reagent 后的样品在室温（15-30°C）静置 5 分钟，以利于样品核蛋白体完全分离

b. 按每 1ml RNAEx ZOL Reagent 加入 0.2ml 氯仿（自备），小心盖好样品管后，剧烈震荡 15 秒，后置于室温（15-30°C）静置 2-3 分钟。

c. 2-8°C，10000g 离心 15 分钟。离心后，混合物分离为下层（酚-氯仿相）、中间相以及上层无色水相。RNA 存在于上层无色水相中，体积约为*初加入 RNAEx ZOL Reagent 体积的 60%左右。

RNA 分离提取步骤：

1. RNA 沉淀

a. 将上述水相转移到一个新的管中，并保存有机相（若希望分离 DNA 或蛋白质）。混合异丙醇从水相中沉淀 RNA，每 1ml 用于初始裂解的 RNAEx ZOL Reagent 使用 0.5ml 异丙醇，室温（15-30°C）静置 10 分钟。

b. 2-8°C，10000g 离心 10 分钟。离心前看不出 RNA 沉淀，离心后在管侧和管底会出现胶状沉淀即为 RNA 沉淀。

2. RNA 洗涤

a. 弃上清。用 75%乙醇洗涤 RNA 沉淀一次，每毫升用于初始裂解的 RNAEx ZOL Reagent 试剂使用至少 1ml 75%乙醇，涡旋混匀后于 2-8°C，不超过 7500g 离心 5 分钟，弃上清

3. 溶解 RNA

a. 在上述过程结束后，简单干燥 RNA 沉淀（空气干燥或真空干燥 5-10 分钟，不要真空离心离心干燥 RNA）。重要的是不要让 RNA 沉淀过于干燥，这将大大降低其溶解度。加入 25-200μl 无 RNase 水或 0.5% SDS，用吸头吹打几次至溶解，于 50-60°C 放置 10 分钟使 RNA 彻底溶解（注：若后续进行酶学实验，请勿使用 0.5% SDS 溶液溶

解）。溶解后置于-80°C 保存。

DNA 分离提取步骤：

1. DNA 沉淀

a. 样品加入氯仿分层后，移去上层水相提取 RNA，吸取中间层和有机层的 DNA 用乙醇沉淀。每使用 1ml RNAEx ZOL Reagent 加入 0.3ml 无水乙醇混匀，室温静置 2-3 分钟，2-8°C 不超过 2000g 离心 5 分钟以沉淀 DNA。

2. DNA 洗涤

a. 移去苯酚-乙醇上清液（如需要，保存上清用于蛋白质分离，操作见下）。用 0.1M 的柠檬酸钠溶液（溶于 10%乙醇的柠檬酸钠溶液）清洗沉淀的 DNA。每毫升用于初始的 RNAEx ZOL Reagent 试剂添加 1ml 溶液。每次清洗时，室温静置 30 分钟 DNA沉淀（间歇混匀），2-8°C 2000g 离心 5 分钟，弃上清。重复一次。

b. 用 75%乙醇再洗一遍 DNA 沉淀，每使用 1ml RNAEx ZOL Reagent 加入 1.5-2ml 75%乙醇，室温放置 10-20 分钟（间歇混匀），2-8°C 2000g 离心 5 分钟，弃上清。

c. 室温放置晾干 DNA 5-15 分钟，用 8mM NaOH 溶解 DNA。从 50-70mg 组织或 107细胞中分离的 DNA 溶于 300-600μl 8mM 的 NaOH 溶液中，浓度常为 0.2-0.3μg/μl。

注：提取的 DNA 沉淀不易溶于水和 Tris 缓冲液中，建议用弱碱溶解，8mM NaOH 的 pH值为 9，NaOH 溶液溶解后可用 TE、HEPES 调节 PH。从某些样品（尤其是组织）中提取的 DNA 中可能包含一些胶状不溶物可用>12000g 离心 10 分钟除去。

蛋白质分离操作步骤：

1. 蛋白质沉淀

a. 苯酚-乙醇上清液（每 1ml RNAEx ZOL Reagent 试剂上清体积约 0.8ml）中加入异丙醇可沉淀出蛋白质。每毫升用于初始裂解 RNAEx ZOL Reagent 试剂中添加 1.5ml 异丙醇，室温静置 10 分钟，然后 2-8°C 12000g 离心 10 分钟以沉淀蛋白质，弃上清。

2. 蛋白质洗涤

a. 用 0.3M 盐酸胍溶液（溶于 95%乙醇）洗涤蛋白质沉淀 3 次。每毫升每毫升用于初始裂解 RNAEx ZOL Reagent 试剂中添加 2ml 0.3M 盐酸胍溶液。每次洗涤中，室温静置 20 分钟，2-8°C 7500g 离心 5 分钟，弃上清，重复 3 次。*后清洗后，加入 2ml 无水乙醇，漩涡混匀蛋白沉淀，室温静置 20 分钟，然后 2-8°C 7500g 离心 5 分钟以沉淀蛋白质，弃上清。

3. 蛋白质溶解

a. 干空干燥蛋白质沉淀 5-10 分钟，用 1% SDS 溶解蛋白质，反复吹打，50°C 温浴至完全溶解，不溶物 2-8°C 10000g 离心 10 分钟去除。分离得到的蛋白质样品可用于WesternBlot 或者-20°C 保存（长期保存建议-80°C）

1. RNA 酶污染注意事项：

a. 提取过程用品均经过去 RNA 酶处理：玻璃制品可以 150 °C 烘烤 4 小时 ，塑料制品可浸泡于 0.5M NaOH 溶液后用清水冲洗并高压灭菌，吸头及离心管类尽量使用一次性无酶吸头及离心管

b. 佩戴手套及口罩及护目镜：皮肤上常含有细菌和霉菌，可污染 RNA 制备，且同时是RNA 酶来源，同时 RNAEx ZOL Reagent 对皮肤有一定毒性，建议佩戴手套及口罩及护目镜。

c. 尽量于通风橱内提取：避免吸入提取过程中有毒物质。

2. 安全性问题：

a. 本品在与皮肤接触及吞咽有毒性，可导致烧伤。与皮肤接触后，应立即用洗涤剂和大量水冲洗。如感到身体不适，应立即就医

3. 存储性问题：

a. 实验已证明 RNAEx ZOL Reagent 室温下可稳定保存 12 个月，不过依然建议储存于2-8°C 以保证*佳性能，尽量避光保存。

可以代替氯仿使用，并且毒性较小。在单步 TRI 试剂方法中使用可以减少 DNA 污染 RNA 的可能性，本品 不会对分离的 RNA 的质量或数量产生不利影响。

【操作方法】 1. 请按每使用 1ml TRI 试剂（Trizol 试剂或 RNAEx ZOL 总 RNA 提取试剂）加入 200μl 比例来使用（等同 RNA 提取中氯仿的使用）。

【注意事项】
1. 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用，以免污染。
2. RNAEx ZOL 总 RNA 提取试剂（货号：EK-5301）可在 ECOTOP 各平台咨询购买。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作